मानक तैयारी:
प्रत्येक kalalactone संदर्भ मानक के 10 मिलीग्राम के बारे में एक 10 एमएल वॉल्यूमेटिक फ्लास्क में सटीक वजन () 0.01 मिलीग्राम) के द्वारा एक मिश्रित स्टॉक मानक तैयार करें। भंग जब तक मेथनॉल और sonicate के 7.0 एमएल जोड़ें। मेथनॉल और मिश्रण के साथ मात्रा को पतला।
सूचना: वैकल्पिक रूप से, एक कावेन स्टॉक मानक को एक तरह से तैयार करें और केवलिऑन प्रतिक्रिया कारकों का उपयोग करें।
न्यूनतम चार-बिंदु मानक वक्र बनाने के लिए स्टॉक मानक को पतला करें। स्टॉक के सुझाए गए मानक dilutions 1:10, 1:25 और 1: 100 मेथनॉल का उपयोग कर रहे हैं।
सूचना: प्रशीतित तापमान (0 - 5 डिग्री सेल्सियस) पर स्टोर मानकों। Kavalactones 48 घंटे के बाद तेजी से ख़राब हो जाता है। प्रत्येक विश्लेषण से पहले ताजा संदर्भ मानकों की तैयारी की सिफारिश की जाती है।
उपकरण
· Ibr 0.01 मिलीग्राम तक सटीक विश्लेषणात्मक संतुलन
फ्लास्क, वॉल्यूमेट्रिक, क्लास ए, मिश्रित आकार
· शीशियां, टोपी के साथ क्रोमैटोग्राफी
यूएसपी अध्याय में वर्णित उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी प्रणाली। यह सत्यापित करें और दस्तावेज करें कि इंस्टॉलेशन, सॉफ़्टवेयर और सबसिस्टम स्थापना योग्यता / ऑपरेशन योग्यता (IQ / OQ) के लिए प्रदर्शन आवश्यकताओं को पूरा करते हैं।
· फ़िल्टर, 0.45 माइक्रोन, जेलमैन एक्रोडिस्क नायलॉन (पी / एन 4426), व्हामैन परडिसक ™ पॉलीप्रोपाइलीन (कैट। नंबर 6788-2504), व्हामैन जीडी / एक्स ग्लास (कैट। सं। 9894-2504) या समकक्ष सोनिकेटर।
· स्तंभ, YMCbasic, 5 माइक्रोन, 4.6 x 250 मिमी (कैट। सं। BA99S05-2546WW)। समतुल्य स्तंभ, YMC J'Sphere H80, 4 4.6, 4.6 x 250 (Cat। No. JH08S04-2546WT)।
अभिकर्मकों
· पानी, एचपीएलसी ग्रेड या नैनोप्योर
· मेथनॉल, एचपीएलसी ग्रेड
· एसीटोनिट्राइल, एचपीएलसी ग्रेड
· फॉस्फोरिक एसिड, ACS अभिकर्मक ग्रेड
नमूना तैयार करना:
संयंत्र की सामग्री
सटीक रूप से वजन (mg 0.1mg) के बारे में 750 मिलीग्राम बारीक जमीन के तने, छीलने या जड़ सामग्री।
40 एमएल मेथनॉल / पानी (70/30) के साथ सामग्री को 50 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में रखें। कमरे के तापमान पर 60 मिनट के लिए Sonicate।
फ्लास्क को कमरे के तापमान को ठंडा करने और मेथनॉल / पानी (70/30) के साथ मात्रा में पतला और मिश्रण करने की अनुमति दें।
एक HPLC शीशी और टोपी में फ़िल्टर और जगह नमूना।
पाउडर और सॉफ्ट एक्सट्रेक्ट (पेस्ट)
50 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में लगभग 100 मिलीग्राम (mg 0.1 मिलीग्राम) अर्क का वजन करें। (100 मिलीग्राम वजन अर्क में एक 50-60% kavalactone सामग्री पर आधारित है।) सूचना: नमूना लेने से पहले सावधानीपूर्वक समरूपता निकालने। यह 60 डिग्री - 80 डिग्री सेल्सियस गर्म पानी के स्नान में डूबे हुए कंटेनर में निकालने के द्वारा नि: शुल्क बहने तक पूरा किया जाता है।
10 मिनट के लिए या जब तक ठोस के सभी भंग नहीं हो जाते तब तक 40 एमएल मेथनॉल और सोंनेट जोड़ें।
फ्लास्क को कमरे के तापमान को ठंडा करने और मेथनॉल और मिश्रण के साथ मात्रा को पतला करने की अनुमति दें।
एक HPLC शीशी और टोपी में फ़िल्टर और जगह नमूना।
पाउडर के नमूने
कावा अर्क को अक्सर मिश्रित या स्प्रे किया जाता है, जो विभिन्न वाहक पर सूख जाता है। सफलतापूर्वक पाउडर नमूनों को परखने के लिए, एक नमूना तैयारी कदम विकसित करना आवश्यक है जो वाहक से कैवलैक्टोन्स को ठीक करता है। यह शुद्ध मेथनॉल या पानी के साथ पहले निकालने के द्वारा पूरा किया जा सकता है।
क्रोमैटोग्राफिक स्थितियां:
कॉलम: YMCbasic, 5 4.6m, 4.6 x 250 मिमी
स्तंभ तापमान: 40 डिग्री सेल्सियस
प्रवाह दर: YMCbasic के लिए 0.6 एमएल / मिनट; J'Sphere के लिए 1.0 mL / मिनट
मोबाइल चरण: लोकतांत्रिक 0.1% फॉस्फोरिक एसिड: आइसोप्रोपिल अल्कोहल: एसिटोनिट्राइल (64:16:20 v / v)
जांच: 220 एनएम (246 एनएम वैकल्पिक रूप से चयनात्मकता में सुधार करने के लिए)
इंजेक्शन की मात्रा: 5 µL
रन टाइम: 30 मिनट
प्रक्रिया:
निर्देश के अनुसार संदर्भ मानक समाधान और नमूना तैयारियां तैयार करें।
निष्कर्षण विलायक खाली का एक भी इंजेक्शन बनाओ।
मानक तैयारियों का एकल इंजेक्शन बनाएं।
मानक सांद्रता बनाम मानक सांद्रता वाले क्षेत्रों की एक रैखिकता की साजिश बनाएँ।
नमूना तैयारियों के एकल इंजेक्शन बनाएं।
नमूने में कैवलैक्टोन एकाग्रता की गणना करें।
प्रणाली उपयुक्तता:
रैखिक प्रतिगमन का सहसंबंध गुणांक 9990.999 होना चाहिए। डेस्मिथोक्सीयांगोनिन और यांगोनिन चोटियों के बीच का संकल्प ≥1.8 होना चाहिए।
शानक्सी Y- हर्ब जैव प्रौद्योगिकी कं, लिमिटेड